CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 62
Módulo 1
Submódulo 1 Realiza Análisis Microbiológicos
RESUMEN
MEDIOS
DE CULTIVO Y SIEMBRAS
Integrantes: Moreno Joaquín
Alec Diego
Orozco Orozco MariJose
Reyes Valderrama Amira
Sarahi
Sigala Mendoza Daniela
Soto Quiroz Carlos
Alberto
PRODUCCION INDUSTRIAL DE ALIMENTOS 2° A-M
MEDIOS DE CULTIVO
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que
crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo.
Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,
grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
TIPOS DE MEDIO DE
CULTIVO
Los medios de cultivo se utilizan para diferentes
propósitos; la enumeración, el aislamiento de cierto tipo de bacterias, el
mantenimiento de los cultivos para su uso posterior y para facilitar el
reconocimiento de algún tipo de bacteria en particular.
Para estos fines se han desarrollado una gran cantidad de
medios, los cuales, con base en su uso o función, se han clasificado como:
·
Medios selectivos
·
Medios diferenciales
·
Medios selectivo-diferencial
·
Medios de mantenimiento
MEDIOS
SELECTIVOS
Frecuentemente en el laboratorio se requiere aislar un tipo
de bacteria a partir de una mezcla de diversos tipos. Para esto, se han
diseñado medios de cultivo que favorecen el crecimiento de la bacteria de
interés y que inhiben el resto. Esto puede lograrse mediante el uso de
sustancias inhibitorias como los antibióticos, o cierta concentración de
algunas sales; o simplemente agregando una sustancia que sea utilizada
únicamente por el tipo de bacteria que se desea aislar. Un medio de cultivo de
este tipo se denomina medio selectivo.
MEDIO
DIFERENCIAL
MEDIO
SELECTIVO-DIFERENCIAL
Estos son muy útiles ya que, ádemas de la selección de un
tipo de bacteria, se logra, a la vez, información sobre sus características
metabólicas.
MEDIOS DE
MANTENIMIENTO
Se denomina así a algunos medios de variada composición cuyo
fin es mantenerse, satisfactoriamente, la viabilidad y las características
fisiológicas de un cultivo bacteriano. Este tipo de medio generalmente no es
optimo ya que si la bacteria crece rápidamente tiende a morir aceleradamente.
La mayoría de las formulaciones omitn la glucosa porque a pesar de que, en
muchos casos, promueve el crecimiento, es también común la producción de acido,
el cual es dañino para las bacterias.
Su clasificación según sus cualidades
físicas, se distinguen:
·
líquidos
·
semisólidos
·
sólidos
PREPARACION DEL MEDIO
DE CULTIVO
1)
AGUA DESTILADA
Disolver los
componentes del medio en agua destilada. En muchos casos se parte de un
preparado comercial con todos los componentes deshidratados. Siguiendo las
instrucciones del fabricante o del profesor, añadir la cantidad de agua
adecuada para conseguir la concentración deseada de los mismos. Si el medio
contiene un agente solidificante (agar-agar) hay que calentar el preparado
hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una
completa disolución del agar (medios sólidos y semisólidos); para medios
líquidos no es necesario calentar, únicamente se agita la mezcla hasta la
completa disolución de la misma.
3) DISOLUCION.
Una vez disuelto el medio se debe
esterilizar para evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la
forma en que vaya a utilizarse el medio, el procedimiento será diferente:
a) Medios sólidos en placa.- Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir con papel de aluminio. Llevar a esterilizar al autoclave (1210C) durante 15-20 minutos. Una vez estéril repartir en placas de Petri estériles y dejar en reposo para que solidifique.
b) Medios líquidos.- Una
vez disueltos los componentes repartir en tubos a razón de unos 2-4 ml por
tubo, tapar con tapón de aluminio y llevar a esterilizar en autoclave.
SIEMBRA
Sembrar un microorganismo es
colocarlo en un ambiente artificial apropiado para que lleve a cabo su
metabolismo, su desarrollo y reproducción.
Las técnicas de siembra
varían según el estado físico del medio o las necesidades gaseosas de los microorganismos
(aerobios, anaerobios, etc.)
Una condición básica de la
siembra es que se realice bajo rigurosas reglas de asepsia, ya que es
indispensable evitar el crecimiento de gérmenes del ambiente en el cultivo.
Estos microorganismos se denominan contaminantes. La siembra tiene como
finalidad el cultivo, que es el crecimiento de poblaciones microbianas en un
medio de cultivo bajo condiciones de laboratorio.
Una de estas condiciones es
la temperatura de incubación, necesaria para brindarle al microorganismos las
condiciones optimas para su crecimiento in vitro. Los gérmenes poseen
diferentes temperaturas de desarrollo; la mayoría lo hace a 35°C; sin embargo,
a través de temperaturas disgenésicas que pueden ser altas, como cultivos a
60°C típicos de S. faecalis o los cultivos a 44°C para favorecer el desarrollo
de E. coli o bajas a 4°C para el cultivo de Listeria, puede obtenerse solo el
crecimiento de estos microorganismos.
Para el desarrollo de
gérmenes aerobios basta con colocar directamente las cajas o tubos sembrados a
35°C en estufas para cultivo cuya atmosfera es igual a la del ambiente.
La mayoría de los hongos
crecen a 30°C; sin embargo, pueden ser aislados a temperatura ambiente o a35°C
en el medio adecuado. Los tipos de incubación varian según se trate de hongos
filamentosos o levaduriformes; los primeros tienen un desarrollo lento, que
pueden variar entre los 15 y 30 dias. Las levaduras, en cambio, crecen
rápidamente, como la mayoría de las bacterias entre las 24 y 48 horas.
Las placas o tubos sembrados
con muestras donde se sospeche la presencia de bacterias anaerobias,
independientemente del recipiente en la que se genere esta atmosfera, deben
incubarse al menos durante 48 horas entre los 35 y 37°C y reincubarse durante 2
o 4 días más para permitir que los microorganismos de crecimiento lento formen
colonias.
Luego de la inoculación y la
incubación en el medio de cultivo, se producirá en el lugar donde se depositan
los microorganismos su multiplicación. La que se traduce en la formación de una
masa macroscópicamente visible denominada colonia, que es un clon procedente de
un mismo germen y a partir de la cual es posible realizar un aislamiento y el
trasplante.
AISLAMIENTO
Al sembrar el material
proveniente de una muestra clínica por lo general se obtiene un cultivo mixto
(que contiene mas de una clase de gérmenes), del cual es imprescindible separar
los distintos tipos de colonias para obtener cultivos puros o axénicos, porque
los cultivos mixtos proporcionan información de poca utilidad e incluso
errónea.
Solo los cultivos puros
permiten realizar estudios sobre las propiedades bioquímicas (pruebas de identificación
o tipificación) y la sensibilidad a los antimicrobianos selectivos
(antibiograma).
Existen varias técnicas de
aislamiento; las mas utilizadas siempre se basan en el empleo de un medio de
cultivo solido, en el cual los microorganismos dan origen a colonias separadas.
Como cada colonia procede de una sola célula, cuando se tiene un inoculo
medido, se habla de unidades formadoras de colonias (UFC).
Los medios de aislamiento
más frecuentes son:
·
Siembra
por agotamiento por estrías.
Se
trata de un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del
inóculo sobre un medio solido contenido en una capsula de Petri. A medida que
se realizan estrías las bacterias pasan del asa al medio en un numero cada vez
menor, de manera que las estrías iniciales proporcionan un crecimiento
confluyente, mientras que a lo largo de las ultimas estrías se desarrollan
colonias bien aisladas.
·
Siembra
por diseminación en superficie.
Este
método consiste en colocar o.oo5 mL (una gota) del inóculo en el centro de una
placa de Petri con medio de cultivo. Se extiende con espátula de Drigalsky
hacia adelante y atrás, mientras se hace girar la placa, se tapa, se invierte
la tapa y se lleva a incubar.
·
Siembra
de diluciones seriadas.
Consiste
en realizar diluciones sucesivas de la muestra con el objeto de sembrar después
cantidades conocidas de esas diluciones en cápsulas de Petri. Esto permite
conocer el número de microorganismos viables. La viabilidad en microbiología se
define como la capacidad del microorganismo para multiplicarse en un medio de
cultivo.