MEDIOS DE CULTIVO

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS  No. 62

“Lázaro Cárdenas del Rio”

Módulo 1 Submódulo 1 Realiza Análisis Microbiológicos

RESUMEN

MEDIOS DE CULTIVO Y SIEMBRAS

Integrantes: Moreno Joaquín Alec Diego

                       Orozco Orozco MariJose

                       Reyes Valderrama Amira Sarahi

                       Sigala Mendoza Daniela

                       Soto Quiroz Carlos Alberto

PRODUCCION INDUSTRIAL DE ALIMENTOS 2° A-M

MEDIOS DE CULTIVO

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO

Los medios de cultivo se utilizan para diferentes propósitos; la enumeración, el aislamiento de cierto tipo de bacterias, el mantenimiento de los cultivos para su uso posterior y para facilitar el reconocimiento de algún tipo de bacteria en particular.

Para estos fines se han desarrollado una gran cantidad de medios, los cuales, con base en su uso o función, se han clasificado como:

·         Medios selectivos

·         Medios diferenciales

·         Medios selectivo-diferencial

·         Medios de mantenimiento

MEDIOS SELECTIVOS

Frecuentemente en el laboratorio se requiere aislar un tipo de bacteria a partir de una mezcla de diversos tipos. Para esto, se han diseñado medios de cultivo que favorecen el crecimiento de la bacteria de interés y que inhiben el resto. Esto puede lograrse mediante el uso de sustancias inhibitorias como los antibióticos, o cierta concentración de algunas sales; o simplemente agregando una sustancia que sea utilizada únicamente por el tipo de bacteria que se desea aislar. Un medio de cultivo de este tipo se denomina medio selectivo.

MEDIO DIFERENCIAL

Se conoce con este nombre a aquellos medios de cultivo que permiten distinguir diferencias metabólicas de diversas especies o géneros de bacterias o de ciertos grupos de las mismas. Para este fin, se incorpora el medio de cultivo alguna sustancia que pueda ser metabolizada solo por las bacterias que son de interés. Por ejemplo, muchas bacterias fermentan azúcares produciendo ácido, mientras que otras no. Si se incorporan un azúcar, como la lactosa, en el medio y ádemas se agrega un indicador ácido-base, se podrá saber si la bacteria la fermenta debido al cambio de color que ocurre al acidificarse el medio de cultivo.

MEDIO SELECTIVO-DIFERENCIAL

Estos son muy útiles ya que, ádemas de la selección de un tipo de bacteria, se logra, a la vez, información sobre sus características metabólicas.

MEDIOS DE MANTENIMIENTO

Se denomina así a algunos medios de variada composición cuyo fin es mantenerse, satisfactoriamente, la viabilidad y las características fisiológicas de un cultivo bacteriano. Este tipo de medio generalmente no es optimo ya que si la bacteria crece rápidamente tiende a morir aceleradamente. La mayoría de las formulaciones omitn la glucosa porque a pesar de que, en muchos casos, promueve el crecimiento, es también común la producción de acido, el cual es dañino para las bacterias.

Su clasificación según sus cualidades físicas, se distinguen:

·         líquidos

·         semisólidos

·         sólidos

PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO

1)      AGUA DESTILADA

Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos casos se parte de un preparado comercial con todos los componentes deshidratados. Siguiendo las instrucciones del fabricante o del profesor, añadir la cantidad de agua adecuada para conseguir la concentración deseada de los mismos. Si el medio contiene un agente solidificante (agar-agar) hay que calentar el preparado hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una completa disolución del agar (medios sólidos y semisólidos); para medios líquidos no es necesario calentar, únicamente se agita la mezcla hasta la completa disolución de la misma.

2)      AJUSTAR PH

3)     DISOLUCION.

 Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya a utilizarse el medio, el procedimiento será diferente:

a)      Medios sólidos en placa.- Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir con papel de   aluminio. Llevar a esterilizar al autoclave (121⁰C) durante 15-20 minutos. Una vez estéril repartir en placas de Petri estériles y dejar en reposo para que solidifique.

b)    Medios líquidos.- Una vez disueltos los componentes repartir en tubos a razón de unos 2-4 ml por tubo, tapar con tapón de aluminio y llevar a esterilizar en autoclave.

SIEMBRA

Sembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y reproducción.

Las técnicas de siembra varían según el estado físico del medio o las necesidades gaseosas de los microorganismos (aerobios, anaerobios, etc.)

Una condición básica de la siembra es que se realice bajo rigurosas reglas de asepsia, ya que es indispensable evitar el crecimiento de gérmenes del ambiente en el cultivo. Estos microorganismos se denominan contaminantes. La siembra tiene como finalidad el cultivo, que es el crecimiento de poblaciones microbianas en un medio de cultivo bajo condiciones de laboratorio.

Una de estas condiciones es la temperatura de incubación, necesaria para brindarle al microorganismos las condiciones optimas para su crecimiento in vitro. Los gérmenes poseen diferentes temperaturas de desarrollo; la mayoría lo hace a 35°C; sin embargo, a través de temperaturas disgenésicas que pueden ser altas, como cultivos a 60°C típicos de S. faecalis o los cultivos a 44°C para favorecer el desarrollo de E. coli o bajas a 4°C para el cultivo de Listeria, puede obtenerse solo el crecimiento de estos microorganismos.

Para el desarrollo de gérmenes aerobios basta con colocar directamente las cajas o tubos sembrados a 35°C en estufas para cultivo cuya atmosfera es igual a la del ambiente.

La mayoría de los hongos crecen a 30°C; sin embargo, pueden ser aislados a temperatura ambiente o a35°C en el medio adecuado. Los tipos de incubación varian según se trate de hongos filamentosos o levaduriformes; los primeros tienen un desarrollo lento, que pueden variar entre los 15 y 30 dias. Las levaduras, en cambio, crecen rápidamente, como la mayoría de las bacterias entre las 24 y 48 horas.

Las placas o tubos sembrados con muestras donde se sospeche la presencia de bacterias anaerobias, independientemente del recipiente en la que se genere esta atmosfera, deben incubarse al menos durante 48 horas entre los 35 y 37°C y reincubarse durante 2 o 4 días más para permitir que los microorganismos de crecimiento lento formen colonias.

Luego de la inoculación y la incubación en el medio de cultivo, se producirá en el lugar donde se depositan los microorganismos su multiplicación. La que se traduce en la formación de una masa macroscópicamente visible denominada colonia, que es un clon procedente de un mismo germen y a partir de la cual es posible realizar un aislamiento y el trasplante.

    

AISLAMIENTO

Al sembrar el material proveniente de una muestra clínica por lo general se obtiene un cultivo mixto (que contiene mas de una clase de gérmenes), del cual es imprescindible separar los distintos tipos de colonias para obtener cultivos puros o axénicos, porque los cultivos mixtos proporcionan información de poca utilidad e incluso errónea.

Solo los cultivos puros permiten realizar estudios sobre las propiedades bioquímicas (pruebas de identificación o tipificación) y la sensibilidad a los antimicrobianos selectivos (antibiograma).

Existen varias técnicas de aislamiento; las mas utilizadas siempre se basan en el empleo de un medio de cultivo solido, en el cual los microorganismos dan origen a colonias separadas. Como cada colonia procede de una sola célula, cuando se tiene un inoculo medido, se habla de unidades formadoras de colonias (UFC).

Los medios de aislamiento más frecuentes son:

·        Siembra por agotamiento por estrías.

Se trata de un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del inóculo sobre un medio solido contenido en una capsula de Petri. A medida que se realizan estrías las bacterias pasan del asa al medio en un numero cada vez menor, de manera que las estrías iniciales proporcionan un crecimiento confluyente, mientras que a lo largo de las ultimas estrías se desarrollan colonias bien aisladas.

·        Siembra por diseminación en superficie.

Este método consiste en colocar o.oo5 mL (una gota) del inóculo en el centro de una placa de Petri con medio de cultivo. Se extiende con espátula de Drigalsky hacia adelante y atrás, mientras se hace girar la placa, se tapa, se invierte la tapa y se lleva a incubar.

·        Siembra de diluciones seriadas.

Consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra con el objeto de sembrar después cantidades conocidas de esas diluciones en cápsulas de Petri. Esto permite conocer el número de microorganismos viables. La viabilidad en microbiología se define como la capacidad del microorganismo para multiplicarse en un medio de cultivo.